Prática de Identificação de Bactérias

A professora  de Biologia Edvânia está trabalhando o estudo das bactérias com  a prática de  identificação de bactérias  em gram-positiva e gram-negativa, bem como, a visualização  e análise morfológica da célula bacteriana, nas características culturais, fisiológicas, serológicas, de  ação patogénica e características moleculares

A técnica de  coloração de Gram é usada para classificar as bactérias em relação à forma, tamanho, morfologia celular e observando a coloração. A coloração de Gram foi originalmente descrita por Christian Gram em 1884 e modificada por Hucker em 1921, comumente usada na prática bacteriológica devido proporcionar uma melhor estabilidade dos reagentes e melhor diferenciação dos microrganismos.

O método de Gram se baseia no fato de que quando certas bactérias apresentam cor  pelo o cristal violeta (corante azul) e depois tratadas pela solução de iodo–iodetada (lugol), forma-se um composto de coloração escura entre o iodo e o corante, que é fortemente retido por um grupo de bactérias e não pode ser removido pelo descoramento subsequente com o álcool – gram positiva.

Outras bactérias, denominadas gram negativas, deixam-se descorar facilmente pelo álcool. Então, as bactérias gram negativas aparecerão coloração em vermelho, ao passo que as gram positivas aparecerão coradas em roxo.

Veja os procedimentos abaixo que a professora usou: 

NOME DA PRÁTICA:

 

- Diferenciando as Bactérias : Gram-Positiva e Gram- Negativa

OBJETIVOS:

- Aprender a realizar a coloração de Gram e compreender porque determinadas bactérias se comportam como Gram positivas ou Gram negativas.

MATERIAL UTILIZADO

-        Pisseta com água;

-        Álcool;

-        Corantes: Cristal de violeta, Fucsina,

-        Lâminas de microscopia,

-        Lamínulas,

-        Lugol,

-        Microscópio óptico;

-        Papel filtro ou absorvente;

-        Cotonetes;

-        Isqueiro;

-        Placa de petri

-        Oleo de imersão

METODOLOGIA

-        Passar os procedimentos da realização da prática para os alunos passo a passo.

-        Coletar com o auxilio de um cotonete, material do dorso da língua;

-        Friccionar o cotonete no centro de uma lâmina de microscopia limpa;

-        Fixar a lâmina passando-a algumas vezes  no meio da chama de um isqueiro;

-        Cobrir o esfregaço com o corante cristal de violeta durante 1 minuto;

-        Escorrer o cristal de violeta e lave a lâmina com água ;

-        Cobrir o esfregaço com o lugol por 1 minuto. Em seguida, lave a lâmina com água;

-        Descore o esfregaço com álcool até que não haja desprendimento do corante e então lave a lâmina com água;

-        Cobrir o esfregaço com fucsina por 30 segundos;

-        Escorrer a fucsina e lave a lâmina com água;

-        Secar a lâmina cuidadosamente com papel filtro/ absorvente;

-        Observar ao microscópio- inicialmente, focalizar a lâmina com as objetivas de menor aumento e depois coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço encaixando a objetiva de 100X;

-        Observar o tipo de coloração e diferenciar as bactérias em gram-positivas e gram-negativas

QUESTÕES PARA DISCUTIR

1º O que diferencia as bactérias gram positiva das gram negativas?

2º Como você explica o comportamento das bactérias G + e G - na coloração de Gram?

3º Sabe-se que se ocorrer um aquecimento exagerado no momento da fixação do material, as bactérias G+ passam a se comportar como G-. Qual seria uma explicação para esse fato?

BIBLIOGRAFIA

Ceará. Secretaria da Educação – Práticas de Biologia: Da origem da vida à Biotecnologia/ Secretaria da Educação; Germana Costa Paixão... [et.al.]. - Fortaleza: Secretaria da Educação, 2009.