A
professora de Biologia Edvânia está
trabalhando o estudo das bactérias com a
prática de identificação de bactérias em gram-positiva e gram-negativa, bem como, a
visualização e análise morfológica da
célula bacteriana, nas características culturais, fisiológicas, serológicas, de
ação patogénica e características
moleculares
A técnica de coloração de Gram é
usada para classificar as bactérias em relação à forma, tamanho, morfologia
celular e observando a coloração. A coloração de Gram foi originalmente
descrita por Christian Gram em 1884 e modificada por Hucker em 1921, comumente
usada na prática bacteriológica devido proporcionar uma melhor estabilidade dos
reagentes e melhor diferenciação dos microrganismos.
O método de Gram se baseia no fato de que quando certas bactérias apresentam
cor pelo o cristal violeta (corante
azul) e depois tratadas pela solução de iodo–iodetada (lugol), forma-se um
composto de coloração escura entre o iodo e o corante, que é fortemente retido
por um grupo de bactérias e não pode ser removido pelo descoramento subsequente
com o álcool – gram positiva.
Outras bactérias, denominadas gram negativas, deixam-se descorar facilmente
pelo álcool. Então, as bactérias gram negativas aparecerão coloração em vermelho,
ao passo que as gram positivas aparecerão coradas em roxo.
Veja os procedimentos abaixo que a professora usou:
NOME DA PRÁTICA:
- Diferenciando as Bactérias : Gram-Positiva e Gram- Negativa
OBJETIVOS:
- Aprender a realizar a coloração de Gram e
compreender porque determinadas bactérias se comportam como Gram positivas ou
Gram negativas.
MATERIAL UTILIZADO
-
Pisseta com água;
-
Álcool;
-
Corantes: Cristal de violeta, Fucsina,
-
Lâminas de microscopia,
-
Lamínulas,
-
Lugol,
-
Microscópio óptico;
-
Papel filtro ou absorvente;
-
Cotonetes;
-
Isqueiro;
-
Placa de petri
-
Oleo de imersão
METODOLOGIA
-
Passar os procedimentos da realização da
prática para os alunos passo a passo.
-
Coletar com o auxilio de um cotonete, material
do dorso da língua;
-
Friccionar o cotonete no centro de uma lâmina
de microscopia limpa;
-
Fixar a lâmina passando-a algumas vezes no meio da chama de um isqueiro;
-
Cobrir o esfregaço com o corante cristal de
violeta durante 1 minuto;
-
Escorrer o cristal de violeta e lave a lâmina
com água ;
-
Cobrir o esfregaço com o lugol por 1 minuto.
Em seguida, lave a lâmina com água;
-
Descore o esfregaço com álcool até que não
haja desprendimento do corante e então lave a lâmina com água;
-
Cobrir o esfregaço com fucsina por 30
segundos;
-
Escorrer a fucsina e lave a lâmina com água;
-
Secar a lâmina cuidadosamente com papel
filtro/ absorvente;
-
Observar ao microscópio- inicialmente,
focalizar a lâmina com as objetivas de menor aumento e depois coloque uma gota
de óleo de imersão sobre o esfregaço encaixando a objetiva de 100X;
-
Observar o tipo de coloração e diferenciar as
bactérias em gram-positivas e gram-negativas
QUESTÕES PARA
DISCUTIR
1º O que diferencia as bactérias gram positiva das gram negativas?
2º Como você
explica o comportamento das bactérias G + e G - na coloração de Gram?
3º Sabe-se que se ocorrer um aquecimento exagerado no momento da fixação
do material, as bactérias G+ passam a se comportar como G-. Qual seria uma
explicação para esse fato?
BIBLIOGRAFIA
Ceará. Secretaria da Educação – Práticas de Biologia: Da origem da vida
à Biotecnologia/ Secretaria da Educação; Germana Costa Paixão... [et.al.]. -
Fortaleza: Secretaria da Educação, 2009.
